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血清与血浆样本在ELISA检测中的差异与选择

发布日期:2025-05-21 | 来源:上海康朗生物技术部
血清与血浆样本在ELISA检测中的差异与选择配图

血清是血液凝固后析出的液体,不含纤维蛋白原和部分凝血因子;血浆是抗凝全血离心后的上清,保留了纤维蛋白原和全部抗凝剂。两者在多数小分子检测中差异不大,但在细胞因子、酶类、激素检测中差异显著。

测IL-6、IL-1β、TNF-α这类细胞因子时,强烈推荐EDTA抗凝血浆。凝血激活过程中血小板α颗粒释放PDGF、TGF-β、IL-1β等介质,使血清结果比真实血浆水平偏高。文献报道血清IL-6可比血浆高20%-60%,具体程度与凝血时间和温度相关。

EDTA浓度过高(超过2mg/mL全血)会螯合二价金属离子,影响酶联反应中HRP活性。市售EDTA-K2采血管(紫色帽)一般含1.8mg/mL,刚好在安全范围内。采血后必须充分颠倒混匀8-10次,避免微凝块堵塞洗板机。

肝素抗凝血浆适用于测补体、环磷酸腺苷等指标,但肝素带负电,可能与带正电的检测抗体形成复合物,导致背景升高。若必须使用肝素,建议做平行验证:同一动物同时留EDTA血浆和肝素血浆,确认偏差小于15%再批量使用。

血清样本的优势在于不引入抗凝剂干扰,适合检测那些受EDTA抑制的金属蛋白酶活性。但血清制备需要室温凝血30-60分钟,此期间细胞因子仍在释放,因此血清结果更接近"凝血应激态",不能直接与血浆数据互认。论文中必须明确写明样本类型,审稿人对这一点越来越敏感。

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